Conceito de Coloração de Gram
A coloração de Gram é um procedimento que permite distinguir bactérias Gram-negativa e bactérias Gram-positivas, que adquirem a coloração avermelhada e entre o azul e o violeta, respetivamente. É deste modo uma técnica de caracterização fenotípica de bactérias. Isto acontece pelas diferenças na estrutura da parede celular das eubactérias e espessura da camada de peptidoglicano. As bactérias Gram-positivas têm uma camada de peptidoglicano mais espessa do que as bactérias Gram-negativas.
O procedimento não é aplicável a células eucarióticas ou células do grupo Archaea porque estas não possuem a camada de peptidoglicano.
Este método de coloração de células bacterianas foi desenvolvido por Hans Christian Gram (século XIX). O método requer quatro passos básicos. Primeiro, a aplicação de uma coloração primária – violeta de cristal – num esfregaço, seguido da adição de um mordente – Iodo de Gram – para aumentar a afinidade do violeta de cristal para as células. Depois, as células são rapidamente descoloradas com acetona, álcool, ou uma mistura de ambos. Por último, é utilizado um contrastante como a safranina que dá a cor vermelha ao citoplasma. Os esfregaços são então visualizados ao microscópio. Nas bactérias Gram-negativas, o precipitado formado no passo de adição do mordente é removido na fase de aplicação do agente descolorante. Isto acontece devido à menor espessura da camada de peptidoglicano e ao facto de a membrana externa ser praticamente solubilizada pelo agente descolorante. Consequentemente, o citoplasma cora de vermelho para as bactérias Gram-negativas, devido à safranina que foi aplicada posteriormente.
Esfregaços de duas culturas bacterianas após a Coloração de Gram. Na imagem A pode-se observar bastonetes Gram-positivos (azul/violeta) e na imagem B bastonetes Gram-negativos (cor de rosa/vermelho). Adaptado de https://asm.org/Protocols/Gram-Stain-Protocols.
Os bacilos esporulados e a maioria dos cocos são Gram-positivos. As espiroquetas e a maioria dos bacilos não esporulados são Gram-negativos.
References:
(2022) Gram Stain Protocols, Consultado em: junho 7, 2022 em https://asm.org/Protocols/Gram-Stain-Protocols
(2022), Differential Staining of Bacteria; Knowing Your Gram Stain Reactions Using Three Simple Rules, Consultado em: junho 7, 2022 em https://www.atsu.edu/faculty/chamberlain/mosdoh/gramstainingrules.htm
(2022) Bacterial Spores, Consultado em: junho 7, 2022 em https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK556071/
(2022) Spirochetes, Consultado em: junho 7, 2022 em https://accessmedicine.mhmedical.com/content.aspx?bookid=2268§ionid=176087682
