Concepto de Ensayo de Bradford
El ensayo de Bradford es un ensayo colorimétrico para determinación de proteína. Este método se basa en el cambio de la absorbencia del colorante Azul Brillante de Coomassie G-250 que se une a las proteínas, en concreto a los residuos de aminoácidos y a sus bases aromáticas. En condiciones ácidas, el colorante Azul Brillante de Coomassie G-250 queda mayoritariamente en su forma catiónica protonada, que presenta coloración roja con un máximo de absorción de 470 nm. La unión del colorante Azul Brillante de Coomassie G-250 a las proteínas induce la conversión del colorante a una forma estable no protonada, de coloración azul, y con un máximo de absorción de 596 nm. Esta forma, azul y no protonada es detectada por la lectura de absorbencia a 595 nm por espectrofotometría a fin de cuantificar la concentración de proteínas. Durante la formación de este complejo, dos tipos de interacción suceden. Las interacciones iónicas e hidróficas estabilizan la forma aniónica del colorante, causando un cambio visible del color. Es un método sensible, pues el complejo proteína colorante presenta un coeficiente de extinción molar elevado.
Algunas desventajas del método de Bradford son su incompatibilidad con detergente y ser menos preciso para proteínas de carácter acídico o básico. Una ventaja de este método es su compatibilidad con agentes reductores, lo que no sucede con otros métodos como el método de Lowry y BCA.
