Conceito de Método do ácido bicinconínico
O método do ácido bicinconínico (BCA), tal como o método de Lowry, baseia-se na conversão de cobre (II) para cobre (I) em condições básicas. Isto é denominado reação de Biureto. O reagente ácido bicinconínico é composto por carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, ácido bicinconínico, tártaro de sódio e hidróxido de sódio. Apresentam influência na reação de Biureto alguns resíduos de aminoácidos e a ligação peptídica.
O ácido bicinconínico é um reagente cromogénico – substância que dá cor à reação – específico para cobre (I). Duas moléculas de ácido bicinconínico reagem com um ião cobre (I), formando um complexo de cor púrpura. A quantidade de cobre (II) reduzido – isto é, cobre (I) – é proporcional à concentração de proteína. Uma vez que duas moléculas de ácido bicinconínico reagem com um ião cobre (I), a quantidade de reagente cromogénico é também proporcional à concentração de proteína. A mudança de cor para púrpura, que absorve a cerca de 562 nm, pode ser analisada espetrofotometricamente. A absorvância medida a 562 nm é diretamente proporcional à concentração de proteína presente na amostra. A quantidade de proteína pode ser estimada utilizando uma curva padrão com outra proteína, isto é, uma proteína cuja concentração seja conhecida, como a albumina bovina sérica.
O ensaio do ácido bicinconínico é mais tolerante a detergentes e agentes desnaturantes como ureia e cloreto de guanidina. Isto é uma vantagem sobre outros métodos colorimétricos, como o método de Lowry, em que interferem estes químicos. Contudo, existem agentes redutores que podem interferir no ensaio do ácido bicinconínico.
