Conceito de Gel de Agarose
Uma das técnicas mais utilizadas para a determinação do tamanho dos fragmentos de ácidos nucleicos é a técnica de electroforese em gel de agarose. É uma técnica básica de separação de moléculas, utilizada em inúmeras pesquisas laboratoriais e ainda em uso em alguns laboratórios forenses. Permite o tratamento e análise de DNA e observar resultados de amplificações, contaminações e digestões do material biológico utilizado. Baseia-se no princípio de migração de fragmentos de ADN tendo em conta o seu tamanho, através da aplicação de uma corrente eléctrica. A agarose, funciona como uma rede/peneira através da qual migram as moléculas de ADN. Quanto mais pequenos forem os fragmentos mais facilidade têm ao atravessar a rede, migrando mais rapidamente que os fragmentos de maior peso molecular. Como o ADN têm polaridade negativa, ao aplicar uma corrente eléctrica, os fragmentos de ADN vão migrar do pólo negativo para o pólo positivo. O deslocamento conjunto de moléculas com o mesmo tamanho resulta na formação de bandas. Ao mesmo tempo, aplica-se amostras padronizadas cujo o perfil de bandas é conhecido e identificado (os marcadores moleculares). O número de pares de bases de todas as bandas dos marcadores moleculares é conhecido por isso, é possível determinar o tamanho das bandas em estudo por comparação, funcionando assim como uma régua.
