Conceito de Ensaio de Bradford
O ensaio de Bradford é um ensaio colorimétrico para determinação total de proteína. Este método baseia-se na mudança de absorvância do corante Azul Brilhante de Coomassie G-250 que se liga às proteínas, em concreto aos resíduos de aminoácidos e às suas bases aromáticas. Em condições ácidas, o corante Azul Brilhante de Coomassie G-250 fica maioritariamente na sua forma catiónica protonada, que apresenta coloração vermelha com um máximo de absorção a 470 nm. A ligação do corante Azul Brilhante de Coomassie G-250 às proteínas induz a conversão do corante a uma forma estável não protonada, de coloração azul, e com um máximo de absorção a 595 nm. Esta forma, azul e não protonoada é detetada pela leitura de absorvância a 595 nm por espetrofotometria a fim de quantificar a concentração de proteínas. Durante a formação deste complexo, dois tipos de interação acontecem. As interações iónicas e hidrofóbicas estabilizam a forma aniónica do corante, causando uma mudança visível da cor. É um método sensível, pois o complexo proteína-corante apresenta um coeficiente de extinção molar elevado.
Algumas desvantagens do método de Bradford são a sua incompatibilidade com detergente e ser menos preciso para proteínas de caracter acídico ou básico. Uma vantagem deste método é sua compatibilidade com agentes redutores, o que não acontece com outros métodos como o método de Lowry e BCA.
